左旋咪唑是一种合成的驱虫药物,广泛应用于兽医学领域,主要用于治疗由线虫引发的寄生虫感染。目前,它不仅在医学方面得到广泛应用,也被用于多种研究领域,尤其是在秀丽隐杆线虫麻痹实验中的重要性尤为突出。作为一种有效的驱虫剂,左旋咪唑的作用机制是通过靶向线虫的乙酰胆碱离子通道受体,从而实现对线虫的麻痹,这为研究神经元功能和肌肉生理学提供了无价的工具。
为了深入探讨毒理学实验,我们下面将介绍一个利用左旋咪唑的实例。研究人员可以以此为框架,利用不同的可溶性药物进行他们的毒性研究。具体材料包括:带盖6孔板、NGM培养基、M9缓冲液、左旋咪唑原液(100mM水溶液)、同步成虫种群以及WMicrotrackerArena设备。
操作步骤简易:首先,制备微孔板。按照标准程序制作NGM培养基;在加入盐和胆固醇后,立即将左旋咪唑加入55°C的NGM琼脂溶液中,然后在未接种OP50的情况下准备左旋咪唑片。制备完成后的两周内可使用,须保存在4°C的容器中。实验开始前,将模板降至室温进行测定。
实验步骤如下:
- 在NGM培养皿中培养同步的成虫种群(OP50);
- 用M9缓冲液将蠕虫从培养皿中取出,并转移至15毫升无菌试管中;
- 让虫子静置,倒出上清液,避免扰动颗粒;
- 用5ml M9缓冲液进行清洗,短暂摇动或翻转试管;
- 重复上述清洗步骤,倒出上清,并加入3ml M9缓冲液;
- 计数每10μl中的虫数,计算平均值;
- 制备悬浮液,确保浓度为[35虫/10μl];
- 转移10μl虫液至6孔板;
- 使用WMicroTrackerARENA观察蠕虫活动;
请注意,至少进行3次技术重复和2次生物重复。
在实验结果中,我们评估了左旋咪唑对N2运动活性的剂量抑制反应曲线,观察不同浓度的治疗效果(0µM(对照)、100µM和200µM)。在23℃下记录4小时的运动活动,数据代表四个独立实验的平均值,进行重复实验。
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